כיצד להפוך את הג 'ל agarose

תוֹכֶן

• הוראות
• הכנת ג'ל agarose
• שים לב
• מה שאתה צריך

Agarose ג'לים נעשים על ידי מדענים העובדים במעבדות ביולוגיה מולקולרית ללמוד שברי דנ"א אשר שונו במהלך העבודה הניסויית. הטכניקה של ביצוע agarose ג'ל היא מיומנות שגרתית בסיסית כי חייב להיות שולט על ידי כל החוקרים כפי שהוא מאפשר הדמיה ישירה של גדלים שונים של DNA עבור אימות ושיבוט פרויקטים הגן. למרות הכנה ג 'ל לא קשה, כמו עם כל נהלי המעבדה, זה צריך להיות רק ניסה על ידי איש מקצוע מיומן מדעית בגלל הסיכונים הביולוגיים המעורבים.

הוראות

כיצד להפוך את הג 'ל agarose (Comstock Images / Comstock / Getty Images)

הכנת ג'ל agarose

1. ודא בסיסים ג 'ל אין סדקים או כל דבר שיכול לגרום agarose חם לדלוף. ניקוי מגשים עם אלכוהול 70% ולאפשר להתייבש לחלוטין. בבסיס שני קצוות פתוחים ושני קצות סגורים. בפורמטים מסוימים, קליפים מסופקים עם אותם על מנת לסגור את הקצוות, אבל רוב חייב להיות אטום על ידי הצבת קלטות בין החלקים הפתוחים. לחץ על הקלטת בחוזקה ובבטחה, כפי שהם עשויים להתרחק מן המחזיק ולאפשר agarose חם לדלוף.

2. בהתבסס על גודל של קטע ה- DNA להיות מופרדים ונותחו על ג'ל agarose, לקבוע את האחוז המתאים כי יהיה צורך. לדוגמה, ב 1% (w / v), ג 'ל agarose יהיה יעיל לניתוח של 0.5 עד 10 קילו קטעי DNA. ככל שאחוז (יותר agarose), קטן יותר את השברים שניתן להפריד. ניסויים שגרתיים לנצל מגוון של 0.5% ל 2% agarose. עבור 1% agarose ג'ל, לשקול 1 גרם של אבקת agarose ב ההלבשה הכימית או מערכת הכלה אחרים. מעבירים בזהירות לאזור הכנת המעבדה של הג'ל.

   
   

3. באזור הכנה ג'ל המתאים, למדוד 100 מ"ל של חיץ אלקטרופורזה. זה צריך להיות בטמפרטורת החדר. מעבירים את אבקת agarose לבקבוק fireproof ולשפוך את נפח נמדד של חיץ אלקטרופורזה. בעדינות לחמם את התערובת בתנור מיקרוגל, אבל לא להרתיח את זה, כי אידוי יכול לשנות את אחוז agarose הנוכחי. ודא כי כל agarose הוא מומס, לנער לערבב היטב, לאפשר מגניב מעט ולאחר מכן להוסיף 0.5 מיקרוגרם למיליליטר של ethidium bromide. אין לנשום כל אדי כמו זה עלול לגרות את הריאות ואת הרקמה הרירית. כמו כן, לא לחמם את הפתרון לאחר אתיד ברומיד נוספה. לנער שוב כדי לערבב, ולאחר מכן בעוד הפתרון הוא עדיין חם מספיק כדי להישפך, לוותר על הבסיס מוכן. שים לב שאם כמות גדולה של מדגם או ריכוז קטן של DNA קיים, ג'ל עבה עשוי להתבצע. עם זאת, ג'ל עדין יותר קל לנתח כי הם יהיו יותר בבירור מצולם.

4. הכנס את מסרקים לתוך ג'ל ליצור חריצים או בארות עבור המדגם להיות ממוקם. אפשר להתקרר לטמפרטורת החדר למשך מספר שעות או במקרר למשך מספר דקות. במקרה האחרון, פעם ג'ל מוכן, נוכחות של גבישים agarose יש לשים לב. בדרך כלל, הם נעלמים אם ג'ל מותר לחמם לטמפרטורת החדר על השיש במשך כמה דקות לפני השימוש. בזהירות להסיר את המסרקים כדי לא לקרוע את הג'ל או לשבור את הבארות. ג'ל agarose מוכן כעת לשימוש. אם לא נעשה שימוש מיידי, זה יהיה צריך להיות עטוף צלופן או מאוחסנים במיכל פלסטיק במקרר כדי למנוע ממנו להתייבש או להמיס.

   
   

שים לב

• ריאגנטים בשימוש הם קרצינוגנים אפשריים ויש לטפל בהם עם הגנה נאותה. אם מתרחשת שגיאה במהלך הכנת הג'ל, זה אף פעם לא צריך להיות מחומם, אבל בוטלו ג'ל חדש מוכן שוב.

מה שאתה צריך

• אבקת Agarose עבור אלקטרופורזה
• TAE או חיץ TBE
• את'ידיום ברומיד
• בסיס ג'ל
• קלטות או ג 'ל בסיס קליפים
• ג'ל מסרקים
• קשקשים וחומרים מתכלים
• אתנול
• מגבות מעבדה
• ציוד מגן אישי