תוֹכֶן
Agarose ג'ל אלקטרופורזה הוא הליך מדעי המשמש במחקר ואבחון פרויקטים הקשורים במחקר של חומצות גרעין. היא מאפשרת למדען או לטכנאי להפריד בין מולקולות חומצות הגרעין הטעונות, כגון DNA, לפי גודלם, ומשמשת לניתוח המוצרים הנוצרים על ידי הניסוי, כגון תגובת שרשרת הפולימראז. הוא משמש באופן שגרתי כי הוא זול לרוץ, תהליך מהיר ומאפשר התאוששות של חומצה גרעין להיות מנותח.
מה שהופך את הג'ל
לאסוף את כל הפריטים הדרושים ולנקות אותם עם אתנול 70%. הפריטים כוללים מגש יצוק ג 'ל, סרט דביק, מעבדה בכיתה agarose, צלוחיות או צילינדרים, ריכוז 10x (Tris-Borate-EDTA, TBE) חיץ לרוץ, ethidium bromide, צבע, ואת המדגם להיות מנותח. כמו כן, ודא שיש לך מאגר ג'ל אלקטרופורזה ומקור חשמל. Agarose הוא מוכן על ידי שקילה את הכמות המתאימה של קלטת DNA להיות מנותח, ערבוב זה עם חיץ TBE ו נמס במיקרוגל. בדרך כלל, פתרון של 1% עד 2% מספיק כדי לכסות גדילי דנ"א רבים שנלמדו בביולוגיה מולקולרית יומית. דנ"א קטן דורשים ג'לים מרוכזים יותר, בעוד גדולים יותר דורשים ג'ל מדולל יותר. הפתרון agarose מעורבב עם ethidium bromide, אשר יחברו חומצה גרעין במהלך הליך אלקטרופורזה. פתרון זה הוא שפך לתוך המסה להמיס של ג'ל, בדיוק כמו מסרק דפוס מוכנס, ואת התערובת נשארת כדי לחזק.
הכנס והפעל את הג'ל
ג'ל מוסר מהמגש ושקוע בתוך מאגר ג'ל אלקטרופורזה המכיל חיץ לרוץ. הדגימות להיות מנותח מעורבבים עם צבעים והניח לתוך בארות בג'ל שנוצרו על ידי מסרק. סמן או סולם נכלל גם כדי לאפשר לחוקר לראות את ההתקדמות של אלקטרופורזה ולקבוע את גודל השברים שנוצר. זרם חשמלי מוחל אז על ג'ל, אשר כוחות המדגם כדי לעבור מקצה אחד של ג'ל לאחרת. בתהליך זה, חומצות הגרעין במדגם מופרדות לשברים בגדלים שונים, כאשר מולקולות גדולות יותר מתקרבות אל הבאר, ומולקולות קטנות יותר עוברות לקצה השני של הג'ל.
לנתח את הג'ל
לאחר סיום הליך אלקטרופורזה, ג'ל מוסר מן המאגר והניח transilluminator UV, אשר מאירה את שברי החומצה הגרעינית אשר נקשר ברומיד ethyium פלואורסצנטי. תמונה של זה נעשה ואת להקות של חומצות גרעין ניתן למדוד על פי המרחק שהיגרו דרך הג'ל. הסולם יפריד אותם להקות של גדלים ידועים, וניתן להשתמש בו כדי להנחות את החוקר במהלך הניתוח.