תוֹכֶן
- איתור באמצעות שינויים בצבע
- שימוש בקורא ELISA למדידה
- ישיר ELISA תחרותי (cytochrome ג)
- דגירה הנוגדן העיקרי צינורות
מבחן ELISA הוא assay immunosorbent אנזים מקושר המשתמש נוגדנים או אנטיגנים יחד עם אנזים מסוים כדי לעזור לקבוע את הריכוז של נוגדנים או אנטיגן. אם אתם נוטלים ELISA ואינם יכולים להשתמש בנוגדנים ספציפיים כדי לקבל את התוצאות שלכם, ELISA תחרותית מוצעת משום שהיא משתמשת באנטיגן המצומד לאנזים במקום לנוגדן ולשיטת זיהוי אחרת.
איתור באמצעות שינויים בצבע
פרוטוקול נפוץ עבור ELISA תחרותי הוא להשתמש נוגדן ראשוני מטוהרים מטוהרים. הנוגדן מעיל את הבארות של צלחת microtiter והוא מודגרות עם סטנדרטים לא ידועים. לאחר מכן יתווסף אימונוגן לצמידות עם הנוגדן הראשוני, אשר יחובר לאתרי הנוגדן שעדיין לא נכבשו. המצע משמש לאחר מכן כדי ליצור שינוי צבע למדוד ריכוז מחייב.
שימוש בקורא ELISA למדידה
השתמש צלחת פוליסטירן microtitre ולהוסיף את הנוגדן העיקרי כל טוב. כדי להשיג מחייב מקסימלי, למלא את הבאר עם מיקרוגרם אחד של הנוגדן. דגירה את הצלחת במשך ארבע שעות בטמפרטורת החדר. הוסף את נוגדנים ללכוד העיקרי לשטוף את הבארות עם PBS (פוספט שנאגרו מלוחים). דגירה צלחות עם חיץ חסימת במשך שעתיים בטמפרטורת החדר. לשטוף את הבארות פעמיים שוב עם PBS ולהוסיף את הסטנדרטים. מניחים את הפתרון מצמידים אנטיגן בבארות ו דגירה שוב במשך שעתיים. לשטוף את הצלחת שוב עם PBS ארבע פעמים. מוסיפים את המצע ומודדים את הצפיפויות באורך הגל הספציפי באמצעות קורא ELISA.
ישיר ELISA תחרותי (cytochrome ג)
עבור ELISA תחרותי ישיר, ניתוח דילול בסרום של אנטיגן אתה משתמש בניסוי חייב להתבצע. צלחת microtiter מצופה מכן עם c ציטוכרום ו מודגרות בן לילה. החלק ELISA של assay מבוצעת מכן על ידי תוספת של חסימת נוגדן מגיב משני. תוצאות קליטה נקראות עם קורא microplate.
דגירה הנוגדן העיקרי צינורות
בהליך זה, הנוגדן העיקרי מודגרת במבחנות שבהן האנטיגן של עניין נקשר אליו. הדגימות מתווספים לאחר מכן בארות של צלחות microtiter ו מודגרות. הבארות נשטפים אז כדי להסיר מכלולים אנטיגן נוגדנים לא מאוגדים, ולאחר מכן הפתרון חוסם נוסף כדי למנוע את הנוגדנים השני מחייב את הבארות. הנוגדן המשני הוא קרא אז על צלחת הקורא כדי לקבל את התוצאות.