איך לעשות אגר מזין בצלחת פטרי

תוֹכֶן

• הוראות
• איך
• מה שאתה צריך

המרק המזין משמש לחיידקים culturing, כגון Escherichia coli. המתכונים למרק זה משתנים בהתאם למין החיידקי, כמו גם נוכחות של שינויים גנטיים, כגון עמידות לאנטיביוטיקה, למשל. מרק יכול להיות מוקשה על ידי תוספת של אגר אגר, המאפשר חיידקים ליצור מושבות ברורות, ואילו בתרבות נוזלית הם פשוט להתפזר ברחבי נפח. זוהי טכניקה בסיסית, אבל חיוני עבור שיטות מתקדמות כגון שיבוט גנים או מבחני מיקרוביולוגי. מאמר זה מניח כי זנים מעבדה של Escherichia coli יהיה מתורבת בצלחות אגר Luria מרק (או צלחות פטרי).

הוראות

צלחות פטרי (Jupiterimages / Comstock / Getty Images)

1. למדוד 10 גרם של טריפטון חיידקי, 5 גרם של תמצית שמרים, 5 גרם של נתרן כלורי, 15 גרם של אגר או agarose ו 1 מ"ל של הידרוקסיד 1N נתרן. מערבבים אותם עם סטרילי, autoclaved נפח של מים מזוקקים עד 1 ליטר בינוני מתקבל. החיטוי בינוני בקבוקים או צלוחיות חצי מכוסה במשך 25 דקות. אפשר לו להתקרר כ 50 מעלות צלזיוס לפני הוספת ריאגנטים כי ניתן להשמיד בחום גבוה, כגון אנטיביוטיקה או תוספי תזונה אחרים.

2. אפשר בינוני autoclaved כדי מגניב ל 50 מעלות צלזיוס ולא פחות מ 45 מעלות צלזיוס, כמו אגר יהיה מקל על מיכל לפני שהוא שפך. השג צלחות פטרי סטריליות ויוצקים מספיק כדי לכסות את כל שטח השטח לפחות חצי לעומק שלהם. הימנע מילוי יתר, ועדיף לא נותנים את אגר להגיע לקצה העליון של הצלחת. המתן עבור מיצוק בסביבה סטרילית (למשל, תחת תא זרימה למינרית), משאיר את מכסה פתוח אחד בפינה של מכסה המנוע.

3. יבש את הצלחות. למרות שהם יכולים לשמש ברגע שהם מוצקים, לחות מסוימים יהיו נוכחים על פני השטח של אגר, אשר ימנע את המושבות של חיידקים מ דבקות מספיק. לכן עדיף לייבש את הצלחות לפני החלת כל חיידקים, למשל על ידי השארת אותם בטמפרטורת החדר למשך כמה ימים או במשך חצי שעה תחת תא זרימה למינרית או 37 ° C חממה.

   
   

4. אחסן את הצלחות. הצלחות היבשות צריכות להיות מוערמות במהופך (הפוך) ומוכנסות באריזות המקוריות שלהן, חתומות בקלטת ועטופות בנייר כסף כדי להגן עליהן מפני אור, או במיכל מתאים. תמיד לכתוב את תאריך הכנה ולהימנע שימוש אם הצלחות הם יותר מחודשיים.

איך

• בצע כמו רבים של השלבים הקודמים (רצוי כל) בסביבה סטרילית (למשל, תחת להבה או מכסה המנוע למינרית למינרית) כדי למנוע זיהום אוויר חיידקי נכנסים וצומחים במדיום.

מה שאתה צריך

• 10 גרם של בטטו טריפטון
• 5 גרם של תמצית שמרים
• 5 גרם של NaCl
• 1 מיליליטר של 1N NaOH
• 15 גרם של אגר או agarose
• תוספי מזון, כגון אנטיביוטיקה או גלקטוזידים
• החיטוי
• כלי מעבדה
• צלחות פטרי
• זרימה למינרית
• נחושת בונזן
• החיטוי וחומרים מתכלים
• קשקשים ומוצרי צריכה